5 Easy Facts About how HPLC works Described
5 Easy Facts About how HPLC works Described
Blog Article
物質の持つ特定波長の光を吸収する性質を利用した検出器。次のようなものが存在している。
内部にカラムを収納して加熱あるいは冷却を行い、カラムの温度を制御する装置。カラムヒーターとも称する。
試料を注入する部分で、手動式（マニュアルインジェクター）と自動式（オートインジェクター）がある。
, which permits us to discover a wide choice of mobile phases with only seven experiments. We begin by altering the quantity of acetonitrile during the cellular phase to supply the absolute best separation in just the specified Evaluation time.
one–1 μg of injected analyte. An additional limitation of the refractive index detector is that it can't be used for a gradient elution Until the mobile period elements have similar refractive indexes.
シリカゲルの粒子径が小さければ小さいほどピークの分離性は良くなるが、送液に必要なポンプの圧力が高くなる。そのため、ポンプ－インジェクター間、インジェクター－カラム間の配管の耐圧を上げたり、カラム自体を比較的高温の下にさらして溶媒の粘度を下げ、抵抗を小さくする工夫をしている。
Since the cellular period flows in the column, the compounds within the sample communicate with the stationary section. This conversation causes the compounds to different primarily based on their specific Qualities, for example polarity, dimensions, demand, or affinity.
前述した従来の順相タイプに対して、逆相クロマトグラフィーにおいては固定相に低極性のもの（例えばシリカゲルにアルキル基を共有結合させたもの）を、移動相に高極性のもの（例えば水や塩類の水溶液、アルコール、アセトニトリルなどの有機溶媒）を用いる。また珍しいケースではあるが、分離のための移動相pHをシリカゲルの使用範囲から外れたところに設定する必要がある場合、あるいはシリカゲル表面に残っている未反応シラノール基が分離に悪影響を及ぼし、かつそれが移動相の変更によっても解決できない場合には、固定相として樹脂を用いることがある。分析物はより極性の低いほどより強く固定相と相互作用して溶出が遅くなる。また極性の低い物質の割合が多い移動相ほど溶出が早くなる。
Weak resolution means analytes elute too near collectively, generating them challenging to distinguish. This is the way to troubleshoot:
we uncovered how to adjust the cellular period’s polarity click here by blending with each other two solvents. A polarity index, nonetheless, is simply a information, and binary mobile section mixtures with similar polarity indices may not take care of Similarly a set of solutes. Desk 12.five.two
, by way of example, reveals retention occasions for four weak acids in two mobile phases with almost similar values for (P^ key ). Even though the order of elution is identical for both cell phases, Each individual solute’s retention time is influenced differently by the choice of natural solvent.
Degassing website is attained in numerous ways, but the most typical are using a vacuum pump or sparging with an inert gasoline, including He, that has a lower solubility within the mobile section. Particulate components, which can clog the HPLC tubing or column, are taken off by filtering the solvents.
Just after loading the sample, the injector is turned for the inject situation, which redirects the cellular section with the sample loop and on to the column.
The liquid that transports the sample through the column is referred to as the cellular phase. It comprises of one or more solvents picked out according to the Investigation’s exceptional demands.